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Curso: Biología avanzada (AP Biology) > Unidad 3
Lección 2: El impacto del ambiente en la función enzimáticaFundamentos de las gráficas de cinética enzimática
Cómo leer gráficas de cinética enzimática (y cómo se hacen). Km y Vmáx. Inhibidores competitivos y no competitivos.
Introducción
Imaginemos que quieres comprar un automóvil deportivo. ¿Qué te gustaría saber sobre las diferentes opciones (Ferrari, Porsche, Jaguar, etc.) para decidir cuál es el mejor? Uno de los factores obvios sería qué tan rápido puede correr cuando pisas el acelerador a fondo. Pero tal vez también quieras saber información más detallada sobre su rendimiento, como qué tan rápido puede acelerar de 0 a 100 km/hr. En otras palabras, en lugar de saber únicamente su velocidad máxima, también querrías saber la cinética de cómo el automóvil alcanza esa velocidad.
Los bioquímicos tienden a sentirse de manera semejante con respecto a las enzimas que estudian. Quieren saber todo lo que puedan sobre los efectos de una enzima en la velocidad de reacción, no solo qué tan rápida puede ser cuando trabaja a todo lo que da.
De hecho, puedes obtener una gran cantidad de información sobre el funcionamiento de una enzima y su interacción con otras moléculas, como los inhibidores, tan solo con medir qué tan rápido cataliza una reacción bajo una serie de condiciones diferentes. La información obtenida en estos experimentos generalmente se representa en forma de gráficas, por lo que dedicaremos un poco de tiempo a discutir cómo se elaboran dichas gráficas (y cómo se leen para obtener el máximo provecho de ellas).
Fundamentos de las gráficas de cinética enzimática
Las gráficas como la que se ve a continuación (que muestra la velocidad de reacción como una función de la concentración de sustrato) se usan a menudo para mostrar información sobre cinética enzimática. Proporcionan una gran cantidad de información útil, pero también pueden resultar muy confusas la primera vez que las ves. Aquí, iremos paso a paso por el proceso de elaboración e interpretación de una de estas gráficas.
Imagina que tienes tu enzima favorita en un tubo de ensayo y quieres saber más acerca de cómo se comporta bajo distintas condiciones. Así que realizas una serie de pruebas en las que tomas diferentes concentraciones de sustrato -digamos, 0 M, 0.2 M, 0.4 M, 0.6 M, 0.8 M y 1.0 M- y encuentras la velocidad de reacción (qué tan rápido tu sustrato se convierte en producto) cuando añades enzima en cada caso. Por supuesto, tienes que ser cuidadoso para añadir la misma concentración de enzima en cada reacción, de forma que puedas comparar manzanas con manzanas.
¿Cómo determinas la velocidad de reacción? Bueno, lo que en realidad quieres es la velocidad de reacción inicial, justo en el momento en que combinas el sustrato y la enzima, y esta cataliza la reacción tan rápido como puede a esa concentración particular de sustrato (porque la velocidad de reacción disminuirá a cero conforme se usa el sustrato). De este modo, medirías la cantidad de producto sintetizado por unidad de tiempo al inicio de la reacción, cuando la concentración de producto aumenta en forma lineal. Este valor, la cantidad de producto sintetizado por unidad de tiempo al inicio de la reacción, se llama velocidad inicial o
Digamos que ya encontraste los valores
Esta meseta se genera porque la enzima está saturada, es decir, todas la moléculas de enzima disponibles ya están ocupadas procesando sustratos. Cualquier molécuala adicional de sustrato tendrá que esperar hasta que una enzima se desocupe, por lo que la velocidad de reacción (la cantidad de producto generado por unidad de tiempo) está limitada por la concentración de enzima. Esta velocidad máxima de reacción es característica de una enzima en particular a una concentración dada y se conoce como velocidad máxima o
La concentración de sustrato que da una velocidad que está a la mitad de la
Gráficas de cinética enzimática e inhibidores
Bueno, ¿pero qué son los inhibidores? Ya hemos hablado de dos tipos de inhibidores, competitivos y no competitivos, en el artículo sobre regulación enzimática.
- Los inhibidores competitivos afectan el progreso de la reacción al unirse a una enzima, por lo general en el sitio activo, y evitan que el sustrato real se una. En un momento dado, solo el inhibidor competitivo o el sustrato pueden unirse a la enzima (no ambos). Es decir, el inhibidor y el sustrato compiten por la enzima. La inhibición competitiva actúa disminuyendo el número de moléculas de enzima disponibles para unirse el substrato.
- Los inhibidores no competitivos no impiden que el sustrato se una a la enzima. De hecho, el inhibidor y el substrato no afectan la unión del otro con la enzima en lo absoluto. Sin embargo, cuando el inhibidor se une, la enzima no puede catalizar su reacción para producir un producto. De esta forma, la inhibición no competitiva actúa reduciendo el número de moléculas funcionales de enzima que pueden realizar la reacción.
Si quisiéramos mostrar los efectos de estos inhibidores en una gráfica como la de arriba, podríamos repetir el experimento completo dos veces más: añadiendo cierta cantidad de inhibidor competitivo a cada reacción de prueba en una y con cierta cantidad de inhibidor no competitivo en otra. Obtendríamos los siguientes resultados:
- Con un inhibidor competitivo, la reacción puede alcanzar en algún momento su
- Con un inhibidor no competitivo, la reacción nunca puede alcanzar su
Modelo de Michaelis-Menten y enzimas alostéricas
Muchas enzimas actúan de manera similar a la enzima hipotética del ejemplo anterior, generan curvas parabólicas cuando se grafica la velocidad de reacción como función de la concentración de sustrato. Las enzimas que muestran este comportamiento pueden describirse la mayoria de las veces con una ecuación que relaciona la concentración del sustrato, la velocidad inicial, la
Las enzimas Michaelis-Menten son diferentes a las enzimas alostéricas (vistas en el artículo principal sobre regulación enzimática). Las enzimas alostéricas normalmente tienen múltiples sitios activos y a menudo muestran cooperatividad, esto es, que la unión de un sustrato a un sitio activo aumenta la capacidad de otros sitios activos para unir y procesar sustratos.
Las enzimas cooperativas son más sensibles en su respuesta a los cambios en las concentraciones de sustrato que otras enzimas y exhiben una transición "tipo interruptor" de una velocidad de reacción baja a una alta conforme aumenta la concentración de sustrato. Esto corresponde a una curva de velocidad contra sustrato con forma de S, como se muestra arriba.
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¿Porque se modifica la Km en la inhibición competitiva?¿La especificidad aumenta?¿O es porque la cantidad de sustrato para alcanzar 1/2 de V max aumenta(según la definición cinética)?(3 votos)
entonces a meyos sustrato la km no varia?(3 votos)- ¿Que es una curva parabólica?(2 votos)
- Una curva parabólica es básicamente una curva que empieza teniendo un valor bastante bajo, después empiza subiendo y subiendo hasta llegar a un pico máximo en el que baja otra vez hasta el valor mínimo. Es como una función parabólica(2 votos)
- Una curva de progreso es lo mismo que una curva de calibrado ?(1 voto)
- ¿Cómo saber qué sustrato tiene la posibilidad de dar un mayor valor de Vmax?(1 voto)
- No varia tanto en el tipo del sustrato si no que se trata más sobre cuanta concentración de sustrato hay.(1 voto)
- ¿Como saber qué sustrato tiene la posibilidad de dar un mayor valor de Vmax?(1 voto)
Porque algunas enzimas son diferentes a otras(1 voto)- Porque cada enzima sirve para propósitos diferentes, para descomponer diferentes sustratos. A cada sustrato le corresponde una enzima especifica y viceversa.(2 votos)
- El término de ¨aparente¨ en el caso de los parámetros cinéticos, por ejemplo Km aparente, se aplica en dos situaciones específicas, ¿cuáles son esas situaciones?(1 voto)
¿por qué en inglés? por favor subanlo ene español :((0 votos)