secuenciación del ADN

¿Alguna vez se han preguntado cómo secuenciamos  el ADN? Bueno, echemos un vistazo rápido a   la secuenciación de ADN. Vamos a dividir la  secuenciación de ADN en tres pasos diferentes:   el primer paso es tomar la muestra de ADN que nos  interesa secuenciar y usar PCR para amplificar   la muestra. Al utilizar la PCR para amplificar la  muestra podemos generar muchos fragmentos de ADN.   Lo siguiente que hacemos normalmente en la PCR  es agregar nucleótidos. Debemos darle a la cadena   en crecimiento el sustrato desde el cual puede  crecer, normalmente se agregan desoxinucleótidos   regulares y se parecen a esto: tenemos un grupo OH  aquí, tenemos un grupo H aquí, tenemos una base,   luego tenemos un grupo de carbono y oxígeno  hidrógeno. Así es como se ve un nucleótido normal,   pero intercalado en la PCR, lo que también  deseamos es agregar algo que se conoce como   didesoxinucleótido. Un didesoxinucleótido  se parece a esto, básicamente es lo mismo,   pero sólo tiene un hidrógeno aquí, por lo que  se elimina este oxígeno. Y lo que hace es que,   si este didesoxinucleótido, que podemos abreviar  como ddNTP, si esto se incorpora a la cadena en   crecimiento, ya que no hay grupo de oxígeno aquí,  la cadena ya no puede alargarse, básicamente   tenemos la terminación de alargamiento de cadena,  tan pronto como este ddNTP se incorpora. Lo que   podemos hacer es marcar de manera fluorescente  los diferentes didesoxinucleótidos. Por ejemplo,   tenemos cuatro opciones distintas: podemos  etiquetar todas las ges azules, podemos etiquetar   todas las as rojas, todas las tes verdes y todas  las ces anaranjadas. Lo que tenemos son estos   didesoxinucleótidos con diferentes marcadores  fluorescentes que se incorporan a la cadena en   crecimiento y dado que la PCR puede amplificarse  creando millones y millones de fragmentos de ADN,   tendremos cadenas de diferentes longitudes.  Sólo veamos un ejemplo. Imaginemos que tenemos   un nucleótido incorporado aquí, un nucleótido  normal, y luego otro incorporado aquí y luego   al azar, de repente tenemos un didesoxinucleótido  incorporado aquí y esto detendría el alargamiento   de la cadena, entonces tendríamos una cadena de  ADN con sólo 4 nucleótidos de largo. Y después   de otra ronda de PCR podríamos tener 1, 2, 3, 4,  5, 6, sólo está creciendo, está creciendo y de   repente ¿qué pasó? Tenemos un didesoxinucleótido  incorporado. Básicamente hacemos esto y después de   obtener millones de muestras, finalmente podremos  tener algo así. Quizá tengamos sólo un nucleótido   regular y un didesoxinucleótido incorporado, o  quizá tengamos, digamos dos, entonces tendremos   dos y luego tendremos este incorporado. Lo que  podemos ver es que hay cadenas que se están   alargando y que diferentes cadenas terminan en  diferentes puntos por un didesoxinucleótido. Y,   entonces, el siguiente paso es usar electroforesis  en gel para separar las cadenas por tamaño,   así que cuando corremos todos los diferentes  fragmentos en un gel, éste los separará por   tamaño y luego podemos hacer que una computadora  analice todas las etiquetas fluorescentes, y si ve   aquí esta luz fluorescente, entonces sabe que el  segundo nucleótido en la secuencia es una G, por   lo que dirá G; y luego verá aquí, dirá "Está bien,  esta es una C"; luego verá aquí, dirá que tenemos   otra G, y así sucesivamente. Y la computadora, al  leer estas etiquetas fluorescentes, puede darnos   una secuencia de ADN. Y esto es una descripción  general de cómo funciona la secuenciación de ADN.