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Transcripción del video

supongamos que aquí tenemos algunos tubos de ensayo y que en cada uno tenemos soluciones con fragmentos de adn pero qué pasa con los fragmentos de adn en el primer tubo y bueno tal vez me digan que simplemente hay que contarlos y tal vez sí podríamos excepto porque son increíblemente pequeños y muy difíciles de manejar incluso si tuviéramos un fragmento grande de adn porque miren si por ejemplo tuviéramos algo de aproximadamente 5 mil pares de base eso es aproximadamente 1 a 2 micro metros de largo 1 a 2 micro metros de largo si lo estiramos por completo y ni siquiera podemos imaginar lo pequeño que su diámetro porque simplemente su longitud es de 1 a 2 micrómetros ese es un número muy pequeño es prácticamente una otros milésimas de milímetro por eso no podemos tratar de manipular lo físicamente con nuestras manos o con alguna herramienta tosca entonces qué hacemos bueno aquí tenemos otras muestras pero cómo podemos conocer el tamaño de las cadenas de adn que tenemos en esas muestras bueno la técnica que usaremos es la electroforesis en gel que se puede usar para fragmentos de adn o de a rn pero también se puede usar para proteínas y cualquier otra macromolécula para conocer el tamaño de los fragmentos entonces vamos a escribir electroforesis en ge y se le llama así porque involucra a un gel y carga eléctrica y la terminación forest y se refiere al hecho de que provoca haremos que los fragmentos de adn migren a través del gel al aplicar la carga eléctrica entonces la electroforesis se refiere a la migración o movimiento del adn y cómo hacemos esto bueno aquí tenemos nuestro sistema aquí tenemos un gel incrustado en una solución buffet o también conocida como solución amortiguador y el gen más utilizado para esto es la garrotxa que es un polisacárido que se obtiene las algas marinas y literalmente es un gel es un material gelatinoso entonces lo que haremos es que vamos a tomar un poco de estas muestras y vamos a colocarlas en estos pozos entonces vamos a tomar una muestra de este tubo y la ponemos aquí después podemos tomar una muestra de aquí y ponerla acá y está la ponemos aquí y todas estas muestras se encuentran sumergidas en esta solución buffet o amortiguadora que prácticamente consiste en agua con un poco de sal la solución buffer nos ayudará a mantener el ph en un cierto rango mientras aplicamos una carga eléctrica porque si el ph se saliera del rango el sistema pasaría a ser muy ácido o muy básico y eso podría afectar el adn o incluso puede afectar la carga que recibe el adn ahora lo que haremos es que vamos a aplicar una carga al sistema del lado en el que se encuentran las muestras de adn vamos a colocar el electrodo negativo y del otro lado vamos a colocar el electrodo positivo vamos a usar de ventaja el hecho de que el adn tiene una carga negativa a th típicos porque mire en videos anteriores vimos que existen todas estas cargas negativas en el esqueleto de fosfato entonces qué pasará una vez que conectemos esto a una fuente de poder y este lado sea negativo y éste sea positivo claro que la bn empezar a amigas pero será que los fragmentos pequeños migrarán más lejos o serán los más largos bueno tal vez me digan que los fragmentos largos tendrán una carga más negativa así que tal vez lleguen más lejos pero también tenemos que recordar que tienen más masa así que la carga por massa será la misma sin importar la longitud así que lo que determina qué tan lejos llega un fragmento es decir cuánto migra en un cierto tiempo depende de qué tan pequeño e recuerden que aquí tenemos gel agarosa actualmente muchas personas esto en el mecanismo exacto por el que el adn y otro tipo de macromoléculas migran a través del polisacárido pero bueno por ahora imaginen que éste polisacárido es como una marcha por eso las cosas pequeñas pasarán más fácilmente que las grandes entonces si aplicamos la carga por un tiempo supongamos que este adn llega hasta acá y supongamos que bueno yo los estoy coloreando pero en la realidad no se ven así supongamos que este adn llega aquí no llega tan lejos y supongamos que un poco de este adn no llegó tan lejos y un poco llegó hasta aquí entonces si aplicamos la carga y esperamos un poco después de un tiempo supongamos que observamos esto ocurre esta migración y entre más tiempo esperemos más lejos llegarán los fragmentos incluso si esperamos muchos se pueden caer aquí pero supongamos que nos quedamos aquí así que podríamos suponer que en este fragmento deben de estar las moléculas más pequeñas de adn deben de ser las más cortas mientras que éstas son un poco más largas y éstas han de ser más largas pero estos fragmentos son los más largos de todos así que aquí tenemos una mezcla de varios fragmentos largos y aquí todavía tenemos algunos pero no tan largos y tal vez aquí hay algunos fragmentos muy pequeños y lo que acabamos de hacer nos ayuda a saber la longitud relativa de esos fragmentos pero como los medios bueno ahí es cuando entran los marcadores de adn supongamos que aquí tenemos una solución estandarizada que nos servirá como marcador de adn éstas generalmente se compra y vamos a suponer que la solución estandarizada se separa así un poco se queda aquí y otro poco llega hasta acá y otro poco hasta acá ahora de acuerdo a la solución que compramos sabemos que este grupo corresponde a cinco mil pares de bases y supongamos que la banda corresponde a 1.500 parece bar y supongamos que ésta corresponde a 500 pares de bases así que podemos usar este marcador de adn como referencia para medir el tamaño de las demás bandas por ejemplo en la muestra sol tenemos un montón de adn que tiene un tamaño aproximadamente mayor a 500 pares de bases y menor a mil 500 pares de bases mientras que la maestra verde tiene un tamaño aproximadamente mayor a mil 500 parece base así podemos hacer una aproximación y claro podemos elegir nuestra solución estandarizada de acuerdo a lo que pensamos que ocurrirá aquí que es lo que estamos buscando ahora otra cosa importante es que cuando vemos que el adn ha migrado hasta aquí podríamos preguntarnos ok y éste será un solo fragmento de adn pero al analizar los tamaños podemos ver que no estos son muchos adn y no están estirados porque recuerden que incluso algo que tiene cinco mil pares de bases equivale únicamente a 12 micrómetros cuando lo estiramos así que no podríamos verlo a simple vista eso es un milésimo de milímetros no podríamos verlo por eso es que éstas son muchas muchas moléculas de adn que migraron hasta aquí aunque no tienen que ser tan pequeñas para poder migrar a través del g ahora tal vez me diga ok pero espera como puedo ver este adn sobre todo porque son moléculas sumamente pequeñas bueno la respuesta es que si añadimos algún tipo de pigmento al adn eso lo hará visible por ejemplo podría ser algo que le da una propiedad fluorescente uno de los pigmentos más utilizados es el pro muro decidió que es un agente intercalan te porque mire aquí tenemos dos esqueletos de adn y estos son los parece bases pero esta es la molécula de tibio que se ha colocado entre todo lo demás por eso se dice que se intercalan t y en una leku la de adn eso es lo que la hace florescente cuando aplicamos luz ultravioleta entonces insertamos bromuro de ti dio en todas las muestras de adn cuando los fragmentos migran al aplicarlos v brillan por la florescencia y así es cómo los podemos ver y bueno así es como se ve en la vida real aquí tenemos el pozo en el que pusimos la solución para el marcador de adn y estas son las medidas estándar que obtenemos tal vez aquí tenemos cinco mil pares de bases esta banda corresponde a 1.500 parece base y ésta corresponde a 500 pares de base y luego supongamos que aquí pusimos una muestra con otro adn y después de un tiempo observamos que no llegó hasta 500 parece bases pero es un poco más así que aquí tenemos algunos fragmentos con un tamaño un poco mayor a 500 pares de bases y mucho menor a mil 500 parece base aunque bueno no solamente obtenemos un tamaño aquí podríamos tener otro grupo que tenga 1.500 parece bar y tal vez se han visto esto antes cuando las personas realizan análisis genéticos lee en una de estas pruebas realizadas mediante electroforesis engel así que ya sabemos de qué se trata y recuerden que esto no corresponde a un solo fragmento de adn sino que son varios fragmentos de adn junto con algún pigmento como el bromuro decidió así que son muchas moléculas que migraron gracias a la carga eléctrica porque se mueven de la carga negativa a la carga positiva y cómo éstas son un montón de moléculas pequeñas pudieron llegar más lejos porque pudieran pasar a través de la malla del gel de agarosa
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