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Cromatografía en columna

La cromatografía en columna sigue los mismos principios que la TLC a una mayor escala. En este tipo de cromatografía, se llena una columna de vidrio con una fase estacionaria (generalmente gel de sílice), y se coloca la mezcla de compuestos en la parte superior. Luego, la fase móvil (solvente) pasa por la columna de arriba hacia abajo. Tal como sucede con la TLC, la velocidad a la que cada compuesto en la mezcla baja por la columna depende de su atracción relativa por las fases estacionaria y móvil. Creado por Sal Khan.

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Transcripción del video

En un video anterior hablamos sobre la  cromatografía de capa fina, y esta es la   técnica que se utiliza para saber cuántas cosas  tenemos en una muestra, o tal vez podemos decir   para saber las propiedades relativas o la  polaridad relativa de las cosas que hay en   una muestra. En este tipo de cromatografía lo que  hacemos es poner una muestra, normalmente en un   gel de sílice al que llamamos fase estacionaria,  y después ponemos una fase móvil por aquí abajo,   que en este caso deberá ser menos polar y luego  se moverá hacia arriba por el gel de sílice,   y mientras lo hace, como podemos imaginar,  va a interactuar con la muestra original,   y por lo tanto, partes de la muestra original se  moverán hacia arriba con la fase móvil, y partes   diferentes se sentirán atraídas por esa fase móvil  y no atraídas por el gel de sílice en diferentes   grados. Podemos imaginar que si existe una parte  en tu muestra original que es más polar, entonces   será más difícil de mover, porque se va a sentir  atraída a la fase estacionaria y menos atraída a   la fase móvil, y entonces se moverá menos. Así  que esta será la parte más polar de tu muestra   a medida que avanza desde su ubicación original,  y la parte menos polar de tu muestra, bueno, no   se sentirá tan atraída por la fase estacionaria y  será más disoluble en la fase móvil menos polar y,   por lo tanto, llegará más lejos. Esta será la  parte menos polar de tu muestra original. Con   esto podemos ver la separación y podríamos aportar  otras ideas sobre las que hablamos en ese otro   video. En este video quiero presentar una idea  muy muy, muy, muy similar, sólo que las cosas se   mueven en una dirección distinta, es la noción  de cromatografía en columna. Ahora bien, en la   cromatografía en columna, de igual forma que en  la cromatografía de capa fina, tenemos algún tipo   de vial o algún tipo de columna, podemos decir,  y normalmente tiene una pequeña llave por aquí   abajo, porque queremos observar lo que sale por  la parte inferior. Y lo que hacemos es llenarlo   con la fase estacionaria que, una vez más, es  frecuentemente gel de sílice, y este va a ser   muy polar. No tiene que ser gel de sílice pero es  lo más común. Después ponemos en la parte superior   algo de la muestra y después tenemos alguna fase  móvil, el solvente que vamos a poner encima de la   muestra. Vamos a hacer algo como esto, y ¿qué  crees que vaya a suceder? Bueno, tu fase móvil   comenzará a moverse hacia abajo, a través de  la fase estacionaria, y va a interactuar con la   muestra. Ahora bien, ¿qué es lo que pasará con los  componentes más polares de tu muestra? Bueno, los   componentes más polares de tu muestra se sentirán  más atraídos por la fase estacionaria y menos   atraídos por la fase móvil, por lo que se moverán  menos. Entonces las partes más polares de tu   muestra tal vez sólo lleguen hasta aquí, mientras  que las partes menos polares de tu muestra tendrán   menor atracción por la fase estacionaria y se  moverán más con la fase móvil, por lo que es   posible que se muevan hasta acá abajo. Entonces,  la gran conclusión es que la diferencia entre   las dos cromatografías es sólo la dirección en la  que se mueve. En la cromatografía de capa fina la   parte más polar es el punto inferior, mientras que  en la cromatografía de columna la parte más polar   es la capa superior, justo aquí, es decir, esta  área púrpura; y por supuesto todo esto depende   de la polaridad de la fase estacionaria  y la polaridad relativa de la fase móvil.   Pero lo que acabo de mostrar es una situación  típica, por lo tanto, cuando estés trabajando   con cromatografía de capa fina o con cromatografía  de columna debes prestar atención a la dirección.